常用方法及原理

夹心法
夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步为:
a.将具有一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
b.加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行一性键结
c.洗去多余待测检体，加入另一种对抗原一的一次抗体，与待测抗原进行键结
d.洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结
e.洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果原理:针对抗原分子上2个不同抗原决定能的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物

间接法
间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为:
a.将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
b.加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行一性键结。
c.洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。
d.洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器(ELSAreader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值)，以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
原理:利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。

竞争法
竞争法一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
a.将具有一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
b.加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行一性键结
c.加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
d.洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。
e.当需要俠测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA.