ELISA试剂盒的开发通常基于特定物种的目标蛋白或抗原。试剂盒中的关键组分,如捕获抗体、检测抗体及标准品,均针对某一物种的特定蛋白进行优化。例如,人源ELISA试剂盒的抗体通常针对人源蛋白的表位设计,而小鼠或大鼠ELISA试剂盒则针对相应物种的蛋白。这种高度特异性确保了检测的灵敏度和准确性,但也限制了试剂盒在不同物种间的直接通用性。
然而,某些蛋白在不同物种间具有高度保守性,例如细胞因子(如IL-6、TNF-α)或激素(如胰岛素)。如果目标蛋白的氨基酸序列在不同物种间相似度较高,理论上可能存在交叉反应的可能性。但即便如此,交叉反应的程度仍需通过实验验证,因为抗体识别的表位可能因物种差异而发生微小变化,导致结合效率降低或假阴性结果。
在实际研究中,若需使用某一物种的ELISA试剂盒检测另一物种的样本,必须进行交叉反应性测试。具体方法包括:
若交叉反应性验证结果显示信号强度与标准品接近,且背景值低,则该试剂盒可能适用于目标物种的样本检测。但需注意,即使交叉反应性成立,试剂盒的灵敏度和定量准确性可能仍低于针对该物种优化的专用试剂盒。
ELISA试剂盒的物种通用性取决于目标蛋白的保守性及抗体的交叉反应性。虽然某些情况下可实现跨物种检测,但为确保数据的准确性和可重复性,优先选择针对目标物种优化的试剂盒仍是更可靠的选择。研究人员在使用前应充分评估交叉反应性,并通过实验验证结果的可信度。